不同的处理方式下胡桃楸不定芽萌发的效果分析

　　摘 要 以胡桃楸的成熟合子胚为外植体，采用不同消毒方式和培养方式进行组织培养研究，分析了污染率和愈伤组织诱导率。结果表明：紫外线直射15 min灭菌效果最好，污染率及褐化率均最低，分别为15.82%和22.93%;暗培养时间长利于愈伤组织的诱导，以15 d左右为佳。

　　关键词 胡桃楸;外植体;诱导;愈伤组织

　　胡桃楸(Juglans mandshurica)属胡桃科胡桃属的落叶乔木，在我国北方地区是一类果材兼具用珍贵树种，果实具有很高的食用价值，营养丰富，根茎叶有很高的药用价值，木材性状优良，在家具等行业也得到广泛应用。由此可知胡桃楸的栽植应用前景广阔。胡桃楸传统育苗方式主要采取播种繁殖，其种子具有深度休眠的特性，此种繁殖方法存在需要对休眠的种子进行处理且后代无法持续地将母树优良性状保存下来等问题，因此，发展无性繁殖方式优越性更加明显。

　　目前，胡桃楸无性繁殖方式中采取的主要方式是组织培养、扦插等，学者对胡桃楸的扦插[1，2]、组织培养[3，4]方面开展了一系列的研究，相对来说组织培养的优势更加明显，需要的空间小，不受到时间的限制，具有较大的扩繁系数，因此，本研究选择组织培养的方法，外植体选择成熟的合子胚，经过消毒、培养预处理后进行不定芽萌发效果的研究，为胡桃楸不定芽诱导植株再生体系的建立、实现育种技术的改良等方面提供一定的基础。

　　1 材料与方法

　　1.1 试验地点与材料

　　試验所需种子采集于辽宁省凌源市青龙河国家自然保护区，地理坐标为18°51′58″—119°09′39″ E，40°46′21″—40°53′02″ N，处于凌源市的燕山东段暖温带北缘。保护区主要保护人参、紫椴、黄檗、野大豆等珍稀濒危野生植物及其生境，保护天然侧柏林、天然胡桃楸、天然蒙古栎林等典型的原生植被和黑鹳、东方白鹳、金雕、大鸨等珍稀濒危野生动物及其栖息地。

　　青龙河保护区内胡桃楸天然林面积较大，采集保护区内胡桃楸优良母树种子，经过晾晒、外皮清理后放在干燥、通风、温度20～25 ℃条件下备用。在接种前敲碎外壳，将种子尖部的合子胚(带子叶少量)取出作为外植体用于不定芽的诱导试验。

　　1.2 试验方法

　　1.2.1 外植体消毒预处理试验

　　外植体消毒试验共设6个预处理，分别为：0.2%氯化汞溶液处理5 min、10 min;2%次氯酸钠溶液处理10 min、15 min;紫外线直射10 min、15 min。预处理前先取合子胚置于75%酒精溶液中，30 min后捞出按照不同的预处理方案实施消毒处理，用无菌水冲洗4～5遍，最后在培养基上接种。所选择的培养基为改良版的DKW空白培养基，其中每L培养基中另外添加了琼脂6 g、蔗糖30 g，pH控制在5.8左右。6个处理均设置3次重复，每次重复内有外植体8个。接种后2周进行污染率、褐化率调查统计。

　　1.2.2 外植体培养方法预处理试验

　　试验中外植体经过消毒后(选择1.2.1试验中效果最好的消毒预处理方式)，转移到暗环境中进行培养。培养时间共设6个处理，分别为暗培养3、6、9、12、15、18 d。培养基选择改良后的DKW培养基(每L培养基中另外添加了蔗糖30 g、琼脂6 g、6-BA 2.0 mg、吲哚乙酸0.01 mg，pH控制在5.8左右)，对不同暗培养时间愈伤诱导率进行调查。每个处理3次重复，每个重复内安排10个外植体。

　　按照不同时间处理后，将外植体接种到改良的DKW培养基上进行光培养，在控制温度25 ℃、光照强度1 500 lx、光照周期为14 h光照10 h黑暗的条件下培养。对培养后不定芽诱导情况进行统计分析。

　　1.3 调查统计方法

　　利用Excel、DPS进行数据处理。愈伤组织诱导率(%)=外植体中产生愈伤组织的个数/外植体接种总个数×100;不定芽诱导率(%)=外植体中产生不定芽的个数/外植体接种总个数×100。各处理取3次重复平均值。

　　2 结果与分析

　　2.1 不同消毒预处理方法对胡桃楸外植体消毒效果的影响

　　植物外植体消毒处理的效果直接影响后期组织培养的效果。本试验不同消毒预处理方法胡桃楸外植体污染率及褐化率见表1。根据表1可知，选择胡桃楸的成熟胚作为外植体，消毒预处理的方法不同，污染率及褐化率表现也不同：0.2%氯化汞溶液处理5 min的污染率最高，达到70.23%，极显著高于其他处理;其次是2%次氯酸钠溶液处理10 min，污染率为47.28%，与0.2%氯化汞溶液处理10 min、2%次氯酸钠溶液处理15 min的2个处理差异不显著，但极显著高于紫外线直射的2个处理;紫外线处理的污染率最低，且随着直射时间的延长，污染率极显著降低。根据表1可知，褐化率以0.2%氯化汞溶液处理10 min最高，达到62.12%，极显著高于其他处理;其次是2%次氯酸钠溶液的2个处理，但这2个处理之间差异不显著;以紫外线直射的褐化率最低，为20%以下，且直射时间越长，褐化率越低。

期刊VIP网，您身边的高端学术顾问

文章名称： 不同的处理方式下胡桃楸不定芽萌发的效果分析

文章地址： http://www.qikanvip.com/shengwukexue/60296.html