高效液相色谱法测定辣椒油中苏丹红的含量

　　[摘要]本文对国家标准《食品中苏丹红染料的检测方法 高效液相色谱法》(GB/T 19681—2005)中利用高效液相色谱法测定辣椒油中苏丹红含量的方法进行优化，使方法更加简便快捷，且满足实验要求。以正己烷为提取溶剂，提取液经ProElut SDH固相萃取柱净化，经高效液相色谱柱分离，外标法定量。优化后的方法中，苏丹红Ⅰ～Ⅳ在0.16～2.56?g/mL的浓度范围内线性关系良好，苏丹红Ⅰ～Ⅳ的检出限分别为0.010 7?g/kg、0.011 1?g/kg、0.011 9?g/kg、0.011 0?g/kg，加标回收率为89.21%～95.69%。优化后的实验方法易于操作，能够缩短实验时间，有良好的回收率，更适合检测辣椒油中苏丹红的含量。

　　[关键词]高效液相色谱法;辣椒油;苏丹红

　　苏丹红是亲脂性偶氮化合物，它的化学成分中含有一种叫萘的化合物，此物质具有偶氮结构，这种化学结构决定了它的致突变性和致癌性，对人体的肝肾器官具有明显的毒性作用，在人类肝细胞研究中显现出可能致癌的特性。苏丹红属于化工染色剂，主要用于石油、机油和其他一些工业溶剂中，目的是使其增色，在我国禁止应用于食品加工。食品中苏丹红含量的检测方法主要有薄层色谱法、高效液相色谱法、近红外光谱、凝胶渗透色谱、液相色谱-质谱联用法，该方法有机试剂用量大、操作过程烦琐、耗时长。本文对此方法进行了优化，使操作过程简单直观，减少了有机试剂用量，缩短了实验时间，提高了实验效率，更适合用于辣椒油中苏丹红含量的检测[1-4]。

　　1 材料与方法

　　1.1 材料

　　1.1.1 仪器与设备

　　高效液相色谱仪(戴安Ultimate 3000)：赛默飞世尔科技有限公司;万分之一电子天平(先行者CP224C)：奥豪斯仪器(上海)有限公司;十万分之一天平(METTLER AE 240)：梅特勒-托利多有限公司;旋转蒸发仪(Rotavapor R210)：BUCHI有限公司;数控超声波清洗器(KQ5200DB)：昆明市超声仪器有限公司[5]。

　　1.1.2 试剂与材料

　　苏丹红Ⅰ～Ⅳ标准品：美国Stanford Chemicals;正己烷：色谱纯;丙酮：色谱纯;乙腈：色谱纯;磷酸：分析纯;超纯水;ProElut SDH 6mL 30/pkg固相萃取柱：迪马科技;滤膜：0.22?m;辣椒油样品：市售。

　　1.2 标准溶液的配置

　　标准储备液：分别称取苏丹红I、苏丹红Ⅱ、苏丹红Ⅲ、苏丹红Ⅳ标准品各10mg于250mL容量瓶中，正己烷溶解后并定容至刻度线。

　　标准溶液：分别取标准储备液0.1mL、0.2mL、0.4mL、0.8mL、1mL、1.6mL，用正己烷定容至25mL，该标准系列浓度为0.16?g/mL、0.32?g/mL、0.64?g/mL、1.28?g/mL、1.6?g/mL、2.56?g/mL，绘制标准曲线。

　　1.3 样品的前处理

　　1.3.1 《食品中苏丹红染料的检测方法 高效液相色谱法》的前处理方法

　　称取1g样品于小烧杯中，加入适量的正己烷溶解(约10mL)，慢慢加入氧化铝层析柱中(柱中页面约为2mm时上样)，待样液完全流出后，根据样品中油类杂志的多少用10～30mL正己烷洗柱，直至流出液无色，弃去全部正己烷淋洗液，用含5%丙酮的正己烷液60mL洗脱，收集，浓缩，用丙酮定容至5mL，过0.22?m的滤膜，备用[6]。

　　1.3.2 优化后的前处理方法

　　精密称取样品约1g于50mL离心管中，加入10mL正己烷溶解，超声30min，将上清液全部加入ProElut SDH固相萃取柱中(预先用5mL二氯甲烷，5mL正己烷活化平衡)，待上清液全部过滤完后，用5mL正己烷淋洗，再用5mL二氯甲烷洗脱，收集洗脱液于50mL鸡心瓶中，40℃旋干，再用1mL正己烷定容，过0.22?m的滤膜，备用。

　　1.4 色谱条件

　　1.4.1 《食品中苏丹红染料的检测方法 高效液相色谱法》的色谱条件

　　色谱柱：Poroshell 120 EC-C18 4.6×150mm，4.0?m;柱温：30℃;流动相A：0.1%甲酸水的溶液∶乙腈=85∶15;流动相B：0.1%甲酸乙腈溶液∶丙酮=80∶20。流速1.0mL/min;進样量10?L;检测波长：苏丹红Ⅰ为478nm，苏丹红Ⅱ、苏丹红Ⅲ、苏丹红Ⅳ均为520nm。

　　1.4.2 优化方法一的色谱条件

　　色谱柱：Poroshell 120 EC-C18 4.6×150mm，4.0?m;柱温：40℃;流动相乙腈：水(V∶V=90∶10)。流速1.0mL/min;进样量10?L;检测波长：500nm。

　　1.4.3 优化方法二的色谱条件

　　色谱柱：Poroshell 120 EC-C18 4.6×150mm，4.0?m;柱温：40℃;流动相A：乙腈;流动相B：0.2%磷酸。流速1.0mL/min;进样量10?L;检测波长：500nm。

　　2 结果与分析

　　2.1 色谱图比较

　　比较国标法、优化方法一和优化方法二所得到的色谱图可看出，三种方法中不同的流动相均能使苏丹红Ⅰ、苏丹红Ⅱ、苏丹红Ⅲ和苏丹红Ⅳ有效分离。但国家标准中的流动相配置过程烦琐，使用有机试剂量较大，且分析时间最长。优化方法一中所用的是乙腈和水进行等度洗脱，虽分析时间最短，但苏丹红Ⅱ和苏丹红Ⅲ的分离度较其余两种方法较差，且苏丹红Ⅳ的峰型也不如其余两种方法好。优化方法二的流动相是乙腈与0.2%磷酸进行梯度洗脱，各苏丹红的峰型良好，分离度佳，且分析时间也不长[7-8]。

　　推荐阅读：食品类sci二区影响因子小的期刊

　　

期刊VIP网，您身边的高端学术顾问

文章名称： 高效液相色谱法测定辣椒油中苏丹红的含量

文章地址： http://www.qikanvip.com/shengwukexue/52100.html