12株奶牛乳房炎链球菌的分离、鉴定和耐药性分析

来源:期刊VIP网所属分类:生物科学发布时间:2019-12-09浏览:

  摘要:为了解扬州、泰州地区引起奶牛乳房炎的主要病原体,于2015年11月至2017年6月期间对扬州、泰州地区奶牛场送检的乳房炎奶牛的乳样进行病原体分离,共分离鉴定出11株无乳链球菌菌株,1株乳房链球菌菌株。使用卡那霉素、庆大霉素、环丙沙星、氨苄西林、头孢氨苄、头孢西丁、多黏菌素B、红霉素、四环素、万古霉素、氧氟沙星、阿奇霉素等药物进行了耐药性试验,结果表明,分离菌对卡那霉素、庆大霉素、氨苄西林和多黏菌素B等药物有一定的耐药性,对其他几种药物敏感。

  关键词:奶牛;乳房炎;病原菌;药敏试验

江西畜牧兽医

  《江西畜牧兽医》(双月刊)创刊于1982年,是由江西省农业厅主管、江西省畜牧兽医学会和江西省畜牧技术推广站主办的刊物。

  奶牛乳房炎是指病原微生物侵入奶牛乳腺组织或外伤、化学刺激乳腺组织所引起的奶牛乳房炎症[1]。乳房炎是奶牛最常见的疾病,不仅会影响产奶量和牛奶品质,也因治疗时间长、大量使用多种抗生素,造成药物残留和细菌耐药性的产生。我国关于奶牛乳房炎发病率的报道在46%~70%[2,3]。

  引起奶牛乳房炎病原菌种类较多,有时为多重感染,最常见的是金黄色葡萄球菌、无乳链球菌、乳房链球菌、停乳链球菌和大肠杆菌[4]。链球菌属致病菌,感染奶牛乳房后所引起的临床症状不明显,从而不易被牛场察觉,危害极大,最直观的经济损失是奶牛乳产量下降,牛奶品质变差。链球菌是革兰氏阳性菌,有荚膜[5],荚膜及其M蛋白在致病过程中起到重要作用[6]。无乳链球菌属于B群链球菌,荚膜多糖、神经氨酸酶等是其重要的毒力因子[7],一些菌株具有溶血特性。部分β型溶血型链球菌致病力强,可引起多种化脓性疾病,产生溶血素、CAMP因子、透明质酸酶和神经氨酸酶等毒性因子[8]。停乳链球菌(GCS)为溶血链球菌,能分泌透明质酸、O型溶血素和纤维蛋白溶解酶[9]。这些毒力因子在致病过程中起到关键作用。

  为了解扬州、泰州地区奶牛乳房炎的主要病原体,对送检的牛乳样本进行了病原分离和鉴定,并进行了耐药性试验。

  1 方法

  1.1 细菌分离

  将送检乳样无菌接种于绵羊血琼脂平板,37 ℃培养24 h,观察是否有菌落生成并进行3次传代纯化,最终记录菌落结果。

  1.2 染色镜检

  对分离得到的菌株进行革兰氏染色,镜检。

  1.3 生化试验

  利用细菌微量生化反应管(购于杭州微生物试剂有限公司,操作方法与判定标准参照说明书)对分离所得菌株进行生化指标测定。在37 ℃条件下培养24 h,与对照管比对,观察反应结果并记录。

  1.4 PCR扩增与测序、分析

  使用TaKaRa 16s rDNA Bacterial Identification PCR Kit试剂盒对分离株的16s rRNA基因进行扩增。PCR按照试剂盒说明书进行,体系见表1。PCR反应参照试剂盒提供的条件:94 ℃预变性5 min,变性1 min,退火温度53 ℃ 1 min,72 ℃延伸1 min,再延伸5 min,共30个循环。对扩增产物进行序列测定、BLAST,根据同源性高低确定细菌种属。

  1.5 药敏试验

  使用卡那霉素、庆大霉素、环丙沙星、氨苄西林、头孢氨苄、头孢西丁、多黏菌素B、红霉素、四环素、万古霉素、氧氟沙星、阿奇霉素等药物进行分离菌株的耐药性试验。

  2 结果与分析

  2.1 细菌分离结果和菌落形态

  牛乳样本接种血平板,37 ℃培养24 h后长出菌落,挑取菌落进一步鉴定。分离出12株菌落的形态和特征见表2和图1。

  2.2 染色镜检

  12株菌株均呈短链状,革兰氏染色均有不同程度的蓝色,为革兰氏阳性菌,符合链球菌的特征。

  2.3 生化结果

  对分离的12株链球菌菌株进行了生化特性试验,符合链球菌的生化特性,结果见表3。

  2.4 测序结果

  16s rRNA基因序列进行了BLAST分析,均为链球菌,其中无乳链球菌11株,乳房链球菌1株,序列提交GenBank,登录号见表4。

  2.5 药敏试验结果

  分离菌对卡那霉素、庆大霉素、氨苄西林和多黏菌素B等药物有一定的耐药性,对其他几种药物敏感(表5),判定标准见表6。

  3 讨论

  3.1 奶牛乳房炎病原菌

  试验分离得到的12株链球菌菌株,其中无乳链球菌11株,乳房链球菌1株,说明该地区的奶牛乳房炎病例中无乳链球菌较多。乳房炎病例中,金黄色葡萄球菌是最多的病原菌[10],链球菌分离率仅次于金黄色葡萄球菌,链球菌性乳房炎引起的临床症状不明显,不易被察觉,但造成的危害极大,使奶牛乳产量明显下降,品质变差,它们不仅感染乳房腺体,也会对奶牛乳腺组织造成不可逆的损伤与破坏,导致乳腺泌乳功能受损甚至完全丧失[11]。无乳链球菌专性寄生于奶牛乳腺、乳头和生殖道,可引起婴幼儿的败血症、脑膜炎、肺炎[12],对青霉素、氯霉素、庆大霉素、红霉素等较为敏感。根据本试验得到的结果可以看出,受试药物中有部分药物,如红霉素在奶牛的使用上还有一定的空间。氯霉素在兽医上已经是禁用药物,对庆大霉素有一定的抗药性,分离菌对阿莫西林、万古霉素和阿奇霉素等药物敏感,可用于临床上的感染控制。

  3.2 奶牛乳房炎的防治

  雖然抗生素能有效治疗奶牛乳房炎,但药物残留危害人类健康,同时又产生耐药性,因此不能依赖抗生素。近年来,中草药治疗乳房炎的研究越来越多,中草药通过提高非特异性免疫和抗菌作用实现对奶牛乳房炎的治疗[13-15]。奶牛乳房炎发生时很多是隐形感染的,挤奶时交叉感染会造成大规模乳房炎,奶牛场本身的管理因素,通风不良、卫生问题等也为病原菌传播提供了一定条件,因此,及时对奶牛进行体检、保证奶牛场环境也非常重要。

期刊VIP网,您身边的高端学术顾问

文章名称: 12株奶牛乳房炎链球菌的分离、鉴定和耐药性分析

文章地址: http://www.qikanvip.com/shengwukexue/49698.html