水烛香蒲不同部位黄酮类化合物的动态分析

来源:期刊VIP网所属分类:农业科技发布时间:2021-08-18浏览:

  摘 要: 为了分析水烛香蒲花粉和茎叶中黄酮类成分,以及不同生长期、不同部位中香蒲新苷、异鼠李素-3-O-新橙皮苷和异鼠李素含量。该文采用UPLC-Q-TOF-MS进行定性分析,结合HPLC法对水烛香蒲不同部位中黄酮类化合物含量进行分析评价,色谱条件为PRAZIS C18柱(250 mm × 4.6 mm,5 μm),以乙腈-0.05%磷酸为流动相,梯度洗脱,体积流量1.0 mL·min-1,检测波长254 nm,柱溫30 ℃。结果表明:(1)花粉及茎叶中共解析出42个化合物,其中8个化合物在不同部位中有差异。(2)同一生长环境的水烛香蒲不同生长时期、不同部位中3种黄酮类化合物的含量差异较大。(3)异鼠李素-3-O-新橙皮苷及异鼠李素在香蒲的发育生长过程中含量呈先增加后下降的趋势,茎叶内的这两种成分含量下降明显;在花粉中,香蒲新苷和异鼠李素-3-O-新橙皮苷含量急剧上升,一周内达到峰值;茎叶中香蒲新苷含量较低,在大多数样品中未检出。该研究所建立的测定方法简便、重现性好,并对水烛香蒲中黄酮类成分的含量变化规律进行了研究,对花粉及茎叶中化合物差异进行了分析,为蒲黄的合理采收及香蒲植物的资源化利用提供了科学依据。

  关键词: 水烛香蒲, 香蒲新苷, 异鼠李素-3-O-新橙皮苷, 异鼠李素, 动态分析

植物转基因论文

  香蒲属(Typha)植物为香蒲科(Typhaceae)多年生水生或沼生植物,广泛分布于热带至温带地区(王茹等,2013),全世界有24种,其中我国分布有12种。《中国药典》2015版规定,蒲黄药材为水烛香蒲(Typha angustifolia)、东方香蒲(T. orientalis)或同属植物的干燥花粉(国家药典委员会,2015),具有止血、化瘀、通淋之功效(代玄烨,2017)。蒲黄中含有黄酮类、酚酸类、脑苷、腺苷、甾体类及多糖类等多种成分(陈毓等,2015;白雪薇等,2018;Zeng et al., 2018),其中黄酮类成分为其主要有效成分,具有改善胰岛素抵抗、抑制炎症、改善血液流变学状态以及止血及抗氧化等作用(Chen et al., 2017;Lei et al., 2018)。

  香蒲属植物的茎叶与花粉的化学成分组成类似,均有促进伤口愈合的作用(Ondua et al., 2019)。除药用外,香蒲属植物在食品、饮料、保健品、材料、肥料、工艺品中也有广泛应用,而且在水体环境保护方面,香蒲属植物具有独特的应用价值(陈佩东等,2015)。前期开展的江苏省中药资源普查过程中发现,江苏地区的香蒲属植物野生资源量较大,主要以花粉利用为主,但是茎、叶等其他部位的资源化利用并不充分。蒲黄一般在每年6月份采收(严华等,2019),由于分布广泛,地理生态环境、采收方式等因素的影响,各地采收的花粉中化学成分的组成存在较大差异,同时,花粉中化学成分的动态变化规律也需要深入研究。因此,本课题组首先在江苏省南京市进行了定点连续采样,然后基于UPLC-Q-TOF-MS技术对水烛香蒲花粉、茎叶中的化学成分进行定性研究,同时基于HPLC技术对水烛香蒲不同生长时期花粉和茎叶中3种黄酮类化合物(香蒲新苷、异鼠李素-3-O-新橙皮苷和异鼠李素)的含量进行定量分析,以期探究香蒲属植物的资源性化学成分在不同部位的分布情况以及积累的动态,为香蒲属植物的资源化学成分的进一步动态评价及开发利用提供科学依据。

  1 材料与方法

  1.1 材料

  1.1.1 仪器 AB SCIEX Triple TOFTM 5600质谱仪,电喷雾离子源(ESI)(美国AB SCIEX公司),TF 1.6 Analyst工作站以及Peak View分析軟件,配备LC-20A型液相色谱仪(日本岛津公司)。Agilent 1290高效液相色谱仪;Micro CL21R高速冷冻离心机(Thermo Fisher Scientific);JY10002电子天平(上海上平仪器有限公司);扫描电镜(日本Hitachi S-4800);420三用恒温水箱(江苏金坛国胜实验仪器厂);KQ-500B型超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司);DHG-9023A型电热鼓风干燥箱(上海精宏实验设备有限公司);TGL-16C型高速离心机(上海安亭科学仪器厂)。

  1.1.2 试剂 对照品:香蒲新苷(批号:Y14S8H43976),异鼠李素-3-O-新橙皮苷(批号:H30M3X1),异鼠李素(批号:P23A9F68614),琥珀酸(批号:B20937),对羟基苯甲酸(批号:MKBK3576V),山奈酚-3-O-葡萄糖苷(批号:Y19M8H36474),异鼠李素-3-O-芸香糖苷(批号:S08A8D33447),槲皮素(批号:C09S8Y43412),柚皮素(批号:X21M7C11378),山柰酚(批号:C26J8Y38642)均购自源叶生物科技有限公司。甲醇(色谱纯,批号:180975,江苏汉邦科技有限公司);乙腈(色谱纯,批号:SHBK5734,默克股份有限公司);磷酸(色谱纯,批号:C1801089,阿拉丁)。

  1.1.3 药材 蒲黄样品采集于江苏省南京市栖霞区仙林湖(118°58′59.33″ E、32°07′28.38″ N),原植物经南京中医药大学中药资源学教研室严辉副教授鉴定为香蒲科植物水烛香蒲(Typha angustifolia)。

  1.2 方法

  1.2.1 蒲黄样品采集及前处理 自2019年3月31日起,每隔7天采集一次样品,至有雄花序后,每2天采集1次花粉。采集的蒲黄茎叶,记录生长情况。样品性状见图1,样品株高及基部直径数据见表1。60 ℃恒温干燥后打粉,过三号筛。蒲黄花粉置纱筛中,保持水平状态过筛,除去杂质。

  花粉在用扫描电镜拍照前,经过如下处理:将花粉粒固定在甲醛溶液(5 mL 38%甲醛、5 mL冰醋酸、90 mL 50% 乙醇和5 mL甘油)中,在24 ℃下,分别用浓度为70%、80%、90%、95%和100%的乙醇溶液水合20 min。分别用乙醇和乙酸异戊酯混合溶液(比例为75%∶25%、50%∶50%、25%∶75%和100%乙酸异戊酯)处理20 min,4 h后冷冻干燥(Gao et al., 2019)。

  1.2.2 UPLC-Q-TOF-MS分析

  1.2.2.1 液相色谱条件 Waters ACQUITYTM UPLC HSS T3色谱柱(100 mm × 2.1 mm, 1.8 μm),流速 0.3 mL·min-1,柱温 30 ℃,进样量 4 μL,流动相为0.1%甲酸水溶液(A)(v/v),乙腈(B),梯度洗脱为0~10 min,15% B;10~15 min,15%~30% B;15~25 min,30%~50% B;25~28 min,50%~15% B;28~30 min,15%(Ding et al., 2018)。

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