麻黄碱对脑缺血大鼠运动功能恢复的影响及分子机制研究

　　摘要：为研究麻黄碱对脑缺血大鼠运动功能恢复的影响及相关的分子机制，选取体重为220～250 g的56只雄性SD大鼠，并随机将其分为麻黄碱治疗组、自然恢复组和假手术组，应用Koizumi线栓法建立单侧大脑中动脉闭塞(MCAO)模型。应用横木行走试验在术后1、2、3、4周对其运动功能改善情况进行评定，应用免疫组织化学方法对缺血周围区突触素(SYP)、生长相关蛋白(GAP-43)表达的变化进行检测。结果表明，在各时间点，假手术组大鼠运动功能无明显改变(P>0.05);在术后1周，运动功能评分最低的为自然恢复组，但随着时间的推移，自然恢复组的运动功能不断改善;相对于自然恢复组而言，麻黄碱治疗组运动功能恢复速度明显更快，且在术后1、2、3周，麻黄碱治疗组均明显快于自然恢复组(P<0.05);4周之后，3组之间无显著差异(P>0.05)。在1、2、3周时，免疫组化光密度定量测定结果显示麻黄碱治疗组GAP-43和SYP的表达水平均明显高于自然恢复组。说明麻黄碱可对脑缺血后动物的运动功能恢复速度进行加速，且麻黄碱的加速机制与促进脑内结构重建和神经重塑的分子表达有关。

　　关键词：麻黄碱;脑缺血;大鼠;运动功能;分子机制

　　《中国畜牧业》(半月刊)创刊于1992年，是由全国畜牧总站;中国动物疫病预防控制中心;中国牧工商(集团)总公司主办的刊物。

　　麻黃一直被中医认为有着活血通络的功效。根据相关文献显示，在对脑缺血所致的中风后遗症进行治疗时，麻黄与其他中药配伍使用，对神经功能缺损症状有明显的改善。然而，对中枢神经系统康复的作用及机理方面，单味的麻黄却没有明确的定论，但相关人士普遍认为与麻黄的主要药用成分麻黄碱有关。基于此，本次研究选取了56只雄性SD大鼠，应用Koizumi线栓法建立单侧大脑中动脉闭塞(MCAO)模型，以此来研究麻黄碱对脑缺血大鼠运动功能恢复的影响及相关的分子机制。

　　1 材料与方法

　　1.1 分组动物

　　选取体重为220～250 g的56只雄性SD大鼠，随机将其分为麻黄碱治疗组(24只)、自然恢复组(24只)和假手术组(8只)。术后1、2、3、4周为各组的4个时间点，且在各时间点取不同数量的大鼠(麻黄碱治疗组6只，自然恢复组6只和假手术组2只)进行各项目的检测。

　　1.2 模型的制备

　　应用Koizumi线栓法建立单侧MCAO模型。首先麻醉大鼠，固定于手术台上时取仰卧位，颈前正中行纵行切口，对颈内动脉(ICA)、颈外动脉(ECA)、右侧颈总动脉(CCA)进行分离暴露，并结扎CCA近端和ECA根部，剥离迷走神经。由颈外动脉插入栓线，经颈内动脉到大脑前动脉，机械性阻断大脑中动脉发出处的血供来建立大脑中动脉缺血模型。如果需要再灌注，只需拔出栓线结扎伤口，即可恢复大脑血供。本试验缺血2 h后取出栓线实现再灌注。假手术组步骤与手术组相同，只是不插入栓线。

　　1.3 给药方法

　　大鼠手术后，麻黄碱治疗组大鼠使用麻黄碱腹腔注射(3 mg/kg体重)，每3 d注射一次，其余两组给予同剂量的生理盐水进行注射。

　　1.4 对运动功能进行评定

　　应用横木行走试验在术后1、2、3、4周对大鼠运动功能改善情况进行评定。横木放置于距地面70 mm的高度，直径25 mm，长1 200 mm。按照0～6分法来划分等级。6分：无脚滑现象，能到达终点;5分：少量脚滑现象，能到达终点;4分：在一半以上的路程中出现脚滑现象，能到达终点;3分：肢体在前进时不起作用，能到达终点;2分：在前进时掉下;1分：可以站在横木上，不能前进;0分：掉下。

　　1.5 免疫组织化学检测

　　应用免疫组织化学方法对缺血周围区突触素(SYP)、生长相关蛋白(GAP-43)表达的变化进行检测。SYP及GAP-43均为Sigma公司产品。整个操作过程均严格按照产品说明书进行。

　　1.6 统计学处理和图像分析

　　用积分光密度值反映SYP和GAP-43免疫反应产物的强度和面积。要得出积分光密度值，首先要求出各阳性区光密度的积分和(∑∫ OD)。被检各区在每例标本中均对3张切片进行检测，并取其均值。用x±s表示所得结果。

　　2 结果与分析

　　2.1 各试验组在不同时间的运动功能评分

　　由表1可见，假手术组大鼠运动功能在各时间点均无明显改变(P>0.05);在术后1周，运动功能评分最低的为自然恢复组，但随着时间的推移，自然恢复组大鼠的运动功能不断改善;相对于自然恢复组，麻黄碱治疗组大鼠恢复速度明显更快，且在术后1、2、3周均明显快于自然恢复组(P<0.05);4周之后，3组之间无显著差异(P>0.05)。

　　2.2 GAP-43免疫组化染色结果

　　神经毡位置为GAP-43免疫反应产物的主要存在区，其染色也随着免疫产物和免疫反应的增强而加深。

　　假手术组：少量着色位于神经毡位置，免疫产物在两半球对称分布。不同的时间点之间无显著差异(P>0.05)。

　　自然恢复组：在梗死中心区未见到GAP-43的表达。在1周时GAP-43在梗死周围区的免疫活性达到高峰，在2周时开始降低，4周之后与假手术组之间无明显差异(P>0.05)。

　　麻黄碱治疗组：与自然恢复组有相同的GAP-43表达变化趋势。相较于自然恢复组，在前3个时间点其表达水平均明显偏高(P<0.05)(表2)。

　　颗粒状沉积或棕黄色点状为SYP免疫反应产物，神经毡内为SYP免疫反应产物的分布位置。免疫反应强弱与突触类型、颗粒的大小有关。

期刊VIP网，您身边的高端学术顾问

文章名称： 麻黄碱对脑缺血大鼠运动功能恢复的影响及分子机制研究

文章地址： http://www.qikanvip.com/nongyekeji/49620.html