4种活血化瘀类中药注射剂对血小板聚集功能的影响

　　摘 要 考察 4 种活血化瘀类中药注射液对血小板聚集作用的影响，探讨血小板聚集作用在活血化瘀类中药注射剂中的专属性。选取 4 种具有代表性的活血化瘀类中药注射剂，体外考察其对 ADP、PAF 和 THR 诱导的血小板聚集的抑制作用，找出普适性最好的诱导剂。红花注射液对 3 种诱导剂诱导的血小板聚集均有抑制作用，且抑制作用最强，4 种注射液对 ADP 诱导的血小板聚集均有抑制作用。不同的活血化瘀类注射剂对不同诱导剂诱导的血小板聚集有不同的抑制作用，而 ADP 是一种普适性较好的诱导剂，可以广泛的用在活血化瘀中药注射液抑制血小板聚集活性的考察。

　　关键词 活血化瘀; 中药注射剂; 血小板聚集; 诱导剂

　　血小板聚集是血小板的主要功能之一。血小板在执行生理性止血作用的同时，也在病理性血栓形成过程中起着先导而关键的作用。因此，检测药物对血小板聚集功能的影响，对考察药物是否有抑制血栓形成作用，以及阐明相关的活血化瘀机制等有重要意义。

　　由于活血化瘀类中药注射剂临床药效较为明确，但其药理作用复杂，很难用单一的模型来评价其药理作用，为了更好的评价活血化瘀类中药注射剂的作用，控制其质量，需要找到具有代表性的指标。大量文献报道多数活血化瘀中药都有抑制血小板聚集的作用，但报道较为模糊，为了进一步提高其说服力，文章从抑制血小板聚集的角度对4种活血化瘀类中药注射剂进行再评价。血小板聚集的诱导剂有多种，但哪种诱导剂对活血化瘀类中药注射剂的适用性最好，没有相关报道，因此本文对3种不同的诱导剂进行考察，为今后诱导剂的选择提供理论依据。

　　1材料与方法

　　1.1 材料

　　1.1.1 实验动物 10周龄;体重：1.8~2.1 kg：数量：5只雄性：品系：日本大耳白家兔：级别：普通级;实验动物生产许可证号：SCXK(京)2019-06;由北京隆安实验动物养殖中心提供：实验使用许可证号：SYXK(京)2015-0033，实验地址为北京市药品检验所。

　　1.1.2 试剂 二磷酸腺苷ADP(北京世帝科学仪器公司)，浓度：5 umol/L：凝血酶THR(中国药品生物制品检定所)，批号140605-200824：血小板活化因子PAF(ACROS)，批号：A0208208001：0.9%氯化钠注射液(中国大冢制药有限公司)，批号：0B72H2：枸檬酸纳(北京化学试剂公司)，批号：20180904：灭菌注射用水(大同市惠达药业有限责任公司)，批号：1907261.

　　丹参注射液(10 ml./支，20190623)：舒血宁注射液

　　(5mlL/支，2019/01/05);红花注射液(10 mlL/支，20190325);血栓通注射液(5 ml./支，20190520)。

　　1.1.3 仪器 LG-PABER-1型血小板聚集凝血因子分析仪(北京世帝科学仪器公司)，DT5-离心机(北京时代北利离心机有限公司)，MEK-6318血液分析仪(北京健长医疗器械有限公司)。

　　1.2 方法

　　1.2.1 血浆制备 家兔采取颈总动脉放血75 mlL，加3.8%枸檬酸纳(1：9)抗凝，1 000 r/min离心10 min制备富血小板血浆(PRP)，剩余血样继续3 500 r/min离心10 min制备贫血小板血浆(PPP)。用血液分析仪测定PPP和PRP中的血小板数，PPP中血小板数一般在5x10°个IL以下，利用PPP调节PRP中的血小板数在4.0 x10"～4.5 x 10"2个/L之间[，为保证测量的准确性，血小板聚集的测定应在4h内完成，且PRP不可冷冻保存和过度震荡

　　1.2.2 血小板聚集测定 取PPP 210L加入测试杯，进行仪器调零。再取PRP 180 uL[64]，分别加入不同样品液20 uL，37 ℃孵育180 s，分别加入聚集诱导剂10uL，测定5 min内的最大聚集率。

　　1.3统计方法

　　使用SPSS17.5统计软件采用方差分析，对比各组之间的差异。

　　2实验结果

　　分别测定丹参、红花、舒血宁和血栓通注射液对3种不同诱导剂的血小板聚集最大聚集率，结果见表1-表3。

　　2.1 4种活血化瘀注射剂对ADP诱导的血小板聚集的影响

　　由表1可以看出丹参、红花、舒血宁和血栓通注射液对ADP诱导的血小板聚集均有抑制作用，与空白组相比差异非常显著(P<0.01)，其中红花注射液的抑制作用最强，优于其它3种注射剂。

　　2.2 4种活血化瘀注射剂对PAF诱导的血小板聚集的影响

　　由表2可以看出红花和舒血宁注射液对PAF诱导的血小板聚集具有较强的抑制作用，并与空白组相比具有显著性差异(P<0.01)，丹参和血栓通注射液几乎无抑制作用，与空白组相比无显著性差异(P>0.05)，其中红花注射液的抑制PAF诱导的血小板聚集的作用最强。

　　2.3 4种活血化瘀注射剂对THR诱导的血小板聚集的影响

　　由表3可以看出红花注射液对THR诱导的血小板聚集具有较强的抑制作用，与空白组相比差异非常显著(P<0.01)，丹参、舒血宁和血栓通射液无抑制制作，与空白组相比无显著性差异(P>0.05)。

　　3 讨论

　　由上述结果可以看出，4种活血化瘀注射液对不同诱导剂诱导的血小板聚集的抑制作用各不相同，红花注射液对3种诱导剂均有抑制作用，丹参和血栓通注射液仅对ADP诱导的血小板聚集有抑制作用，舒血宁注射液对ADP和PAF诱导的血小板聚集有抑制作用。由于4种活血化瘀注射剂对ADP诱导的血小板聚集均有抑制作用，因此ADP作为血小板聚集的诱导剂的普适性较强，在今后研究活血化瘀类中药注射剂抑制血小板聚集作用时，可以采用ADP作为诱导剂。

　　活血化瘀类中药药理作用广泛，抑制血小板聚集是其发挥药理作用的主要机制之一。并且大多数活血化瘀类中药都具有抑制血小板聚集的作用，而不同活血化瘀类中药抑制作用强度不同，以此可以考虑利用该指标去量化其药理活性，从生物性的角度控制其质量，克服目前活血化瘀类中药理化质量控制的不足，以保证活血化瘀类中药临床使用的安全有效。

　　测定血小板聚集实验时，离心完的PRP与PPP血浆一定要用血液分析仪测定其血小板数，尽量保证每次实验PRP血浆中的血小板数相同，若PRP中的血小板数过高，可以用PPP进行调节;过低时可降低离心的转速。制备好的血浆最好在4h内完成测定，时间过长血浆的稳定性会下降，并且避免过度震荡，过度震荡也会使血浆的稳定性下降，避免冷藏，低温会加速血小板聚集，以上操作均能导致测量结果有较大的误差。

　　影响血小板聚集实验的因素较多，为了保证每次试验结果的准确性，应建立相应的标准操作规程，不同实验室均应按照此操作规程进行试验，使实验结果具有可比性，加快该方法在不同实验室的推广应用。

　　参考文献

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　　Abstract To study the effect of 4 blood circulation of traditional Chinese medicine injections on platelet aggregation, and to investigate the specificity of platelet aggregation on the blood circulation of TCM injections. Select 4 representative TCM injections of blood irculation, to examine the inhibition of platelet aggregation induced by ADP, PAF, and THR in vitro, and to find the best universal inducer. Saflower injection had inhibition on platelet aggregation by three inducer, and the inhibition was strongest, 4 injections had inhibition on platelet aggregation induced by ADP. Different blood circulation injection had different inhibitory effect of platelet aggregation induced by different inducers, ADP was a better universal inducer, could be widely used in investigated the activity of inhibition of platelet aggregation in traditional Chinese medicine injection

　　Key words Blood circulation, TCM injection, Platelet aggregation, Inducer

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文章名称： 4种活血化瘀类中药注射剂对血小板聚集功能的影响

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