卵巢癌标志物溶血磷脂酸检测的研究进展

　　摘 要 卵巢癌的死亡率高，是严重威胁女性健康的重大疾病。当前，由于缺乏有效、便捷的早期诊断技术，大部分卵巢癌患者被发现时已经处于中晚期而错失最佳治疗时机。因此，对早期卵巢癌的快速、灵敏、低成本和准确检测具有非常重要的意义。在早期卵巢癌患者血液中存在溶血磷脂酸(Lysobisphosphatidic acids， LPA)浓度升高现象，而在其它疾病中却较少出现此情况，因此LPA可作为一种高特异性、有良好临床应用前景的卵巢癌标志物。近年来， 该领域的相关研究取得了较大的进展， 开发了很多LPA的检测技术和方法。本文对LPA的检测方法进行分类、归纳和总结，着重介绍了近年来该领域的重要进展，最后对LPA标记物检测在临床应用方面所面临的挑战进行了分析， 对其发展和前景进行了展望。

　　关键词 卵巢癌; 溶血磷脂酸; 癌症标志物; 质谱检测; 比色检测; 荧光检测; 评述

　　1 引 言

　　卵巢癌是严重威胁女性健康的疾病[1，2]。由于卵巢癌早期缺少症状，筛查方法有限，因此其早期诊断比较困难。75%的卵巢癌患者就诊时已为晚期，而晚期病例療效不佳(晚期卵巢癌患者5年生存率仅25%)[3～6]。因此，虽然卵巢癌的发病率居妇科恶性肿瘤的第三位，但其死亡率高居妇科癌症首位。值得注意的是，早期确诊的卵巢癌患者5年生存率为90%。因此，实现卵巢癌早期诊断，可以大幅度降低卵巢癌的死亡率。目前，临床上卵巢癌诊断的方法主要包括影像学检查(超声成像、计算机断层扫描、正电子发射断层扫描及核磁共振成像等)、组织病理切片等。影像学检查手段能够明确盆腔肿块是否存在，甚至能发现卵巢肿瘤，区分固体肿块和液体囊肿，判断肿块的尺寸，以及观察肿块内部的情况等。尽管如此，影像学检查无法判定卵巢肿块是良性或恶性，且其成本高、价格昂贵、普适性低。组织病理切片检查需要通过手术切除选取标本，制成病理切片，用显微镜检查病变。病理切片是卵巢癌确诊的主要手段，但其缺点是需要手术、创伤性大，且无法发现转移病灶。这些影像学检查、组织病理切片方法通常仅适用于中晚期卵巢癌病人的检查。

　　通过体液检测卵巢癌相关标志物是更为便捷、经济的方法[1，7，8]。卵巢癌标志物主要有人附睾蛋白4、癌抗原-125(Cancer antigen 125， CA-125)和间皮素等，其中CA-125在临床上已被用于卵巢癌的筛查[9～11]。CA-125是一种糖类蛋白质，中晚期卵巢癌患者的CA-125水平会升高，但是检测CA-125对早期卵巢癌的筛检并不适用，有些其它疾病或健康女性在特定生理周期也会引起血清中的CA-125水平升高。此外，在卵巢癌早期仅有25%左右的患者CA-125的水平升高[12]。因此，通过CA-125筛查早期卵巢癌具有高的假阳性和漏诊率。溶血磷脂酸(Lysobisphosphatidic acids， LPA)在卵巢癌细胞的增殖、侵袭等方面发挥了重要作用。在卵巢癌早期，新血管增生对肿瘤的增殖至关重要。Song等[14]研究发现，LPA能诱导卵巢癌细胞高度表达血管内皮生长因子(Vascular endothelial growth factor， VEGF)，而VEGF能在肿瘤部位诱导血管新生。LPA能促使卵巢癌细胞增值转录因子(主要为叉头框蛋白M1， forkhead box M1)表达，而直接诱导卵巢癌增殖[15]。另外，LPA能促进基质金属蛋白酶9(Matrix metalloproteinase 9， MMP9)的表达，MMP9能促进卵巢癌转移和侵袭[16]。这说明LPA在卵巢癌的发生、发展中发挥了重要作用[16～18]。据报道，卵巢癌早期患者血清中的LPA升高率达90%，而中晚期患者可达100%[19]。LPA是一种脂类物质，易从血液、腹水、唾液等中提取，因而便于进行分析和检测。上述结果表明， LPA是具有临床应用前景的卵巢癌早期标记物。

　　基于LPA检测的重要意义，大量检测手段、生物探针被开发用于检测LPA[12，20～33]。本研究组也构建了聚丁二炔比色探针检测血清中的LPA[21]。当前， LPA的检测主要通过液相色谱-质谱联用、气相色谱与原子吸收光谱或质谱联用等方法实现[13，23，34～50]。这些方法具有灵敏度高、普适性好的优势，但缺点是耗时、操作复杂和成本高。LPA也可以通过荧光法、比色法和电化学发光等便捷、经济的方法进行检测，然而它们的特异性和灵敏度需要进一步提高。近年来，由于纳米技术、光谱技术的发展和应用，LPA检测方法在灵敏度、特异性等方面取得了很大的进展。本文对LPA检测主要方法进行分类阐述， 对相关检测机理和影响因素进行了深入的探讨，重点介绍了该领域最新进展，最后展望了LPA检测在临床应用中面临的挑战和机遇。

　　2 质谱法检测LPA

　　质谱技术具有灵敏度高、准确性高、响应时间快、需要的样本量少、通量高等优点，被广泛用于生物样品的分析和检测[51]，已经成为生物样品中脂质分析的常规技术。

　　质谱检测LPA的准确性主要依靠分离技术。采用质谱检测体液(主要包括血液、尿液、唾液等)样本中的LPA通常按照如图1所示的流程[13]，分8个步骤进行。首先是样本收集，然后经过脂质抽提和色谱分离后，再进入质谱仪进行检测和分析[52]。体液样本中最普遍采用的是血液样本。血液中LPA的丰度比溶血磷脂酰胆碱低两个数量级，同时还包含与LPA具有类似结构的溶血磷脂酰丝氨酸、磷脂酰胆碱等，这些脂质分子都会对质谱检测LPA造成干扰。近年来，在LPA的抽提和分离方面的研究也取得了很大的进展。对于抽提方法，已从传统的甲醇/氯仿脂质液-液提取法(Bligh & dyer方法)发展到固-液提取法。对于分离方法，也从早期的毛细管电泳法、薄层色谱法等发展到高效液相色谱法等。目前，高效液相色谱法已经成为分离LPA的常规方法。质谱技术中，常规的电子碰撞电离、电喷雾电离和基质辅助激光解吸电离技术都已被用于LPA的检测。 本文将从抽提、分离方法和电离方式三个方面对质谱法检测LPA的最新进展进行归纳和总结。

　　作者：李年生; 陈立; 肖祚庥; 杨禹祺; 艾可龙

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文章名称： 卵巢癌标志物溶血磷脂酸检测的研究进展

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