藏党参总黄酮含量的测定

　　【摘要】目的探讨藏党参中是否含有总黄酮成分并利用紫外分光光度法测定总黄酮的含量。方法用80%的乙醇提取总黄酮，以芦丁为对照品，在紫外365nm处测定。结果平均加样回收率为95.13%，RSD为2.8%，总黄酮的含量为0.0875%。结论该方法准确可靠，可以作为藏党参总黄酮的含量测定的检测方法。

　　【关键词】 藏党参; 总黄酮

　　Determination of the Content of Total Flavonoid in Codonpsis thalictrifolia WallZHENG Juan, WANG Lifan, HU Huagang, XU SifanCentral University for Nationalities, Institute of Chinese Minority Traditional Medicine, Beijing, 100081, ChinaAbstract：ObjectiveTo determine the content of total flavonoids in Codonpsis thalictrifolia Wall. by UV-spectrometry.MethodsTotal flavonoids was extracted with 80% ethanol and rutin was used as reference substance. The content was detected at 365nm.ResultsThe average recovery rate was 95.13%, RSD was 2.8% and the content of total flavonoids was 0.0875%。ConclusionThis method is simple and reliable and can be used for determination of the content of total flavonoids.

　　Key words：Codonpsis thalictrifolia Wall.; Total flavonoids

　　藏党参 ，藏药名为鲁堆多吉(herba codonopsis mollis)，是公元18世纪《晶珠本草》中记载的2 294种药物之一，全草入药[1]。本品为桔梗科植物长花党参Codonopsis mollis Chipp.的全草, 据《晶珠本草》记载，分为脉花党参黑色类和长花党参白色类两种，视为正品[1]。本研究所用的药材为长花党参Codonpsis thalictrifolia Wall.，生长于青藏高原与西秦岭相汇处，海拔2 000～3 000 m之间，常被藏族人民用于消炎散肿，滋补壮阳，健脾胃，补气，可治疗风湿性关节炎、神经痛、神经麻痹、疮疥痈肿、麻风、脚气病、癔病等[2，3]。

　　通过研究表明鲁堆多吉提取物含有多种有效成分，如多糖，皂苷等(三萜和甾体类)，其中以三萜成分较多[1]。本实验室已测定过多糖和皂苷的含量，分别是24.32%和3.02%[4]。但是尚未检测过藏党参中总黄酮的含量。本次实验就是以藏党参为研究对象，用紫外分光光度计首次对其总黄酮的含量进行测定。

　　1 器材

　　1.1 仪器UNICO2000分光光度计(上海尤尼柯公司); Heidolph旋转蒸发仪(德国海道夫公司);分析天平(瑞士METTLER TOLEDO公司);打粉机(天津泰斯特仪器有限公司);回流提取器(天津市泰斯特仪器有限公司)。

　　1.2 材料芦丁对照品(中国药品生物制品检定所)，镁粉，盐酸，硝酸铝，亚硝酸钠，氢氧化钠及其他试剂均为分析纯(北京化学试剂公司)。

　　1.3 药材藏党参，产地为甘肃省岷县(购于兰州金开来商贸有限公司);潞党参产地为山西省陵川县(购于北京药材公司)。在阴凉处风干，粉碎后，过24目筛，置干燥处备用。

　　2 方法与结果

　　2.1 样品的制备精密称取藏党参6 g，打成粉，置圆底烧瓶，用80%乙醇回流提取两次(每次30 min，每次100 ml左右)，定容到200 ml体积。

　　2.2 总黄酮成分的测定显色反应：取1 ml的溶液，加少许的镁粉和盐酸，呈褐黄色，再取1 ml的溶液，加少量的10%NAOH, 呈橙色，加热之后呈黄色。

　　TLC：以芦丁为对照品，各取供试液及对照液适量点与同一硅胶GF254板上，以醋酸乙酯∶甲醇∶水=15∶2∶1 展开，3%AlCl3作为显色剂。置紫外灯365 nm下观察荧光，供试液色谱在与对照液色谱相应位置上显示相同的斑点。由显色反应及TLC试验表明说明该药材含有黄酮类成分。

　　2.3 标准品溶液的制备精密称取120 ℃减压干燥至恒重的芦丁标准品11 mg，置于100 ml容量瓶中，加适量的80%的乙醇溶液溶解并定容至刻度，摇匀，得0.11 mg/ml的芦丁标准储备液。

　　2.4 最大吸收波长的选择分别量取2.0 ml芦丁标准储备液和样品液置于10 ml容量瓶中，加入3 ml 80%乙醇补齐, 加入5%亚硝酸钠0.4 ml，摇匀，放置6 min，加入10%硝酸铝溶液0.4 ml，摇匀，放置6 min，再加入4%氢氧化钠溶液4 ml，用蒸馏水补齐至10 ml，摇匀，放置15 min后，以相应的试剂做空白对照，用紫外分光光度计进行全波长扫描，比较标准品和样品的扫描曲线，确定以510 nm为最大吸收波长来进行藏党参总黄酮含量的测定。

　　2.5 标准曲线的绘制取芦丁标准品储备液0.0，1.0，2.0，3.0，4.0 ml，置于10 ml容量瓶中，按照如上的方法进行显色，以空白试剂作对照，在510 nm处测定吸光度。见表1。表1 芦丁标准品浓度与吸光度关系(略)

　　2.6 精密度实验取同一供试品溶液按“2.4”项的方法在波长510 nm处，以试剂空白为参比，重复测定4次，计算得RSD=3.36% (n=4)，结果表明仪器的精密度良好。

　　2.7 稳定性实验对同一供试品溶液，每间隔15 min测定吸光度，考察其在1 h之内的稳定性，计算得RSD=3.14 %。结果表明样品的稳定性良好。

　　2.8 重复性实验取藏党参药材粗粉，按上述方法平行制备3份样液，进行含量测定，计算得RSD= 0.57%(n=3)。结果表明，本实验方法的重复性较好。

　　2.9 加样回收率实验分别量取藏党参的样品液1 ml，共4份，置于10 ml的容量瓶里。精密的加入0.11 mg/ml的芦丁标准品储备液0，0.6，0.8，1 ml，再加入80%的乙醇溶液补足至5 ml，照上述方法， 进行含量测定，带入标准曲线回归方程。结果见表2。表2 加样回收率实验(略)

　　回收率(%)=(测得量-原有量)/加入量×100%

　　2.10 藏党参中总黄酮含量的测定精密吸取藏党参样品液1ml 4份，按照“2.4”项的方法进行含量测定，利用回归方程曲线得藏党参的含量为0.087 5%。

　　3 结论

　　本实验采用紫外分光光度法，用80%的乙醇提取藏党参的总黄酮，加样回收率为95.13%，经测定，总黄酮的含量为0.087 5%。此方法准确可靠，结果稳定，重复性好，可作为该药材的测定方法。本研究为进一步研究药理作用提供了实验数据。

　　【参考文献】

　　1]罗达尚. 新修晶珠本草[M]. 成都：四川科学技术出版社，2004:596.

　　[2]杨永昌. 藏药志[M]. 西宁：青海人民出版社，1991：13.

　　[3]宋立人. 中华本草(藏药卷)[M]. 上海：上海科学技术出版社，1999：361.

　　[4]王丽蕃，郑娟，徐斯凡. 藏党参和潞党参中活性成分含量的对比研究[J]. 时珍国医国药，2008，12(19)：2928.

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